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COLETA , TRANSPORTE E PROCESSAMENTO DE Amostras para Exames microbiológicos Profa : Eulália Azevedo Ximenes FLORA Normal Pele Staphylococcus Micrococcus Propionibacterium Corynebacterium Streptococcus Malassezia Pityrosporum Cavidade oral Lactobacillus Neisseria Streptococcus Fusobacterium Actinomyces Treponema Bacteroides Trato respiratório Staphylococcus Corynebacterium Streptococcus Hemophilus Neisseria Branhamella Trato digestório Lactobacillus Bacteroides Lactobacillus Enterococcus Escherichia coli Proteus Klebsiella Enterobacter Bifidobacterium Citrobacter Fusobacterium spirochetes Trato urogenital Streptococcus Bacteroides Mycobacterium Neisseria Enterobacter Clostridium Lactobacillus Candida Trichomonas Ouvido Staphylococcus Corynebacterium Olhos Staphylococcus Streptococcus Neisseria Roteiro a ser seguido para coleta , transporte e Processamento de Amostras para Análise Microbiológica *O material deve ser representativo do local da infecção, deve-se evitar a contaminação com outras amostras de sítios adjacentes; * Seguir os tempos estabelecidos para o transporte a fim de obter a maior chance de recuperação dos micro-organismos envolvidos, especialmente em relação às hemoculturas e outros materiais de maior importância clínica e diagnóstica; * Obter uma quantidade suficiente da amostra para poder realizar os testes solicitados pelo médico; * Utilizar sempre o material mais adequado para a coleta e semeadura de cada tipo de amostra; * Quando necessário, utilizar o meio de transporte compatível com os micro-organismos mais prováveis de serem isoladas; *Obter as amostras, preferencialmente, antes da utilização de antimicrobianos; * Exames diretos devem ser realizados juntamente com as culturas, para melhor interpretação dos resultados; * Cada amostra deve ser sempre bem identificada; **nome do paciente **nº da etiqueta **nº do prontuário **unidade de internação **data e hora da coleta **exames solicitados **indicação clínica **doença de base **informações sobre a utilização de antimicrobianos e identificação legível do médico requisitante. * O pessoal técnico deve ser imediatamente informado da entrega da amostra. Amostra Tempo Crítico Frascos e Meios de Transporte Líquor Imediatamente (não refrigerar) Tubo seco estéril Líquido pleural Imediatamente (não refrigerar) Tubo seco estéril Secreçõescoletadas comSwab Imediatamente (não refrigerar) Tubo seco estéril meio semi sólido (Stuart, Amies) Micro-organismos Anaeróbios 30 minutos Meio de transporte apropriado Evitar otransporteem seringa comagulha Feridas e tecidos 30 minutos ou até 12 horas seemmeio de transporte Meio de transporte apropriado Hemocultura 30 minutos (não refrigerar) Frascos com meios de cultura para rotina manualou automatizada Trato respiratório 30 minutos Tubo seco estéril Trato gastrintestinal 1 hora Tubo seco estéril Urina 1 hora ou refrigerada até 24 horas Tubo seco estéril Fezes 12 horas se em meio de transporte CaryBlairmeio modificado para transportede fezes, com pH 8,4. Boa recuperaçãotambémparaVibrio eCampylobacter Critérios para coleta de amostras destinadas à : Hemocultura: * O sangue deve ser coletado antes de se iniciar a terapia antimicrobiana. Se isso não for possível, coletar a amostra imediatamente antes da próxima administração do antimicrobiano. *Fazer anti-sepsia do local da punção venosa, álcool a 70% , solução iodada a 1% ou com solução de clorohexidina Deixar secar a área por 1 a 2 minutos * Coleta de pelo menos duas hemoculturas, num período de 24 horas com um intervalo de 30 a 60 minutos entre elas. 90% dos episódios de bacteremia costumam ser detectados. * O volume de sangue recolhido deve ser de 1/10 do volume do frasco. ( 4mL/40mL da capacidade do frasco. * A quantidade de sangue colhidos por dia * Adultos – até 20 mL *Crianças entre 1 e 5 mL * Polianetol sulfonato de sódio – 0,025%- 0,030% *2 frascos – aeróbios * 1 frasco para fungos /micobactérias *1 frasco para anaeróbios ATENÇÃO - Nunca colocar os frascos de hemocultura em geladeira: * Sensibilidade de diversos microorganismos a baixas temperaturas Neisseria, Haemophilus * Bactérias consideradas geralmente como contaminantes : Streptococcus epidermidis, Streptococcus do grupo viridans; *espécies do gênero Corynebacterium, Bacillus ; Propionibacterium tem importância clínica se forem isoladas de mais de uma amostra do mesmo paciente . * O número máximo de frascos é de até 4 por dia para um mesmo paciente; * Não se deve colher amostras a partir de um cateter intravascular; LÍQUIDO CEFALORRAQUIDIANO - LCR: O LCR é coletado geralmente por meio de punção lombar, entre L3 e L4; * O material é recolhido em dois frascos estéreis e imediatamente semeado em meio de ágar chocolate; *Não se deve manter esses materiais em geladeira ou a baixas temperaturas; * Realizar uma bacterioscopia e pesquisa de antígeno bacteriano quando a bacterioscopia for sugestiva de meningite (glicose baixa, proteína elevada, aumento de polimorfonucleares) Nos casos de infecção por micobactéria ou por Cryptococcus neoformans – Pesquisa de BAAR ou de leveduras (método da tinta nanquim), após centrifugação do material (3000 rpm por 30 minutos), desprezando o sobrenadante e utilizando apenas o sedimento para a análise. Laboratório de Microbiologia deverá ficar com o tubo que contiver menos sangue. Líquidos corpóreos e estéreis *Quais são ? Líquido pleural, líquido peritoneal, líquido pericárdico, líquido sinovial e líquido ascítico * Coleta Por aspiração utilizando seringa com agulha -volume de 5 a 10 mL. Obter a amostra através de punção percutânea ou cirúrgica Encaminhar para o laboratório o líquido coletado em tubo seco e estéril ou inoculado diretamente nos frascos do equipamento de automação de hemoculturas. * Processamento das amostras: Exames diretos - Microscopia - coloração de Gram, Ziehl – Neelsen e pesquisa de fungos, acordo com a solicitação médica após anamnese. Cultura- Semeio em ágar sangue, ágar MacConkey , ágar chocolate inocular parte do material em um frasco normalmente utilizado para hemocultura, Para os exames diretos recomenda-se (nos casos de material fluido) centrifugação da amostra (3.000 rpm por 30 minutos), sendo descartado o sobrenadante e o esfregaço realizado a partir do sedimento. Secreções do trato respiratório Secreção de nasofaringe – Coqueluche (Bordetella pertussis) - Swab previamente umedecido em água ou salina estéril e inocular logo em seguida em meio de Regan-Lowe ágar (composto de ágar carvão com 10% de sangue de cavalo e cefalexina) S. aureus (clones MRSA), coletar o material com swab e semear em agar manitol salgado. Secreção de orofaringe Streptococcus beta-hemolítico do grupo A (S. pyogenes) semear em meio ágar sangue com trimetoprim e em caldo Todd-Hewitt. Epiglotite - H. influenzae semear em ágar chocolate suplementado com fatores V e X ou usando a técnica do satelitismo, com uma estria de estafilococo (com as placas incubadas em atmosfera de 5% de CO2. Difteria- Corynebacterium A partir da cultura preparar dois esfregaços Um corada pelo Gram e outra pelo Löffler (azul de metileno), para visualizar granulações metacromáticas . Escarro, lavado bronco-alveolar e aspirado traqueal *O escarro Pneumonia, tuberculose ??? Avaliação de uma boa coleta - Uma maneira de avaliarmos se a amostra foi adequadamente coletada é a relação de polimorfonucleares e células epiteliais, em um campo microscópico com aumento de 400x. Mais de 10 polimorfonucleares/campo e menos de 10 células epiteliais/campo é a relação esperada nesses casos. *Tipo de paciente Comunitário - Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus e Haemophilus influenzae Hospitalar